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二氧化碳培养箱是通过在培养箱箱体内模拟形成一个类似细胞/组织在生物体内的生长环境如稳定的温度(37°C)、稳定的CO2水平(5%)、恒定的酸碱度(pH值:7.2-7.4)、较高的相对湿度(95%),来对细胞/组织进行体外培养的一种装置。 广泛应用于细胞、组织培养和某些特殊微生物的培养,常见于细胞动力学研究、哺乳动物细胞分泌物的收集、各种物理、化学因素的致癌或毒理效应、抗原的研究和生产、培养杂交瘤细胞生产抗体、体外授精(IVF)、干细胞、组织工程、药物筛选等研究领域。
在生物活体内,生物体有自身的系统保护细胞或组织,但是在体外培养时,没有任何保护自己的屏障。对于二氧化碳培养箱的基本参数温度、CO2 和湿度,大多数培养箱都能满足研究实验的需要。然而,针对培养过程中面临的各种污染源,各二氧培养箱的控制方式和效果不尽相同,因此细胞体外培养中*的威胁实际上是污染问题。
二氧化碳培养箱中的主要污染源:细菌、真菌(霉菌和酵母菌)、病毒、支原体、非同种细胞。
对于细胞来说,理想的培养环境同样也适合这些污染物的生存,培养箱本身是不会辨别的,而细胞培养部分时间里细胞都是位于培养箱内,因此箱体内能否抑菌或灭菌关键!
细菌:细菌污染后,培养基1-2天就会变色,对细胞生长影响明显,应将污染细胞与其它细胞系隔离,灭菌后丢弃,还要用实验室消毒剂消毒培养器皿和净台。
病毒:由于病毒寄生生存,爆发后尽和正常细胞隔离,丢弃处理,相对来说处理,对操作者威胁较大;尽管病毒污染的细胞不影响原代培养,但生产是不的。因此,潜在病毒是细胞大量生产和、干扰素等生物制品制作中的难题。
真菌(霉菌和酵母菌):真菌生长的比较慢,不象细菌那么被发现,但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了;目前没有好的抑制方法,包括现在常用的两性霉素,一旦污染反复爆发,尤其孢子很难杀灭。
支原体:支原体污染后,因为它们不会使细胞死亡可以与细胞长期共存,培养基一般不发生浑浊,细胞无明显变化,外观上给人以正常感觉,实则细胞已经受到多方面潜在影响,如引起细胞变形,影响DNA合成,抑制细胞生长等,往往被大多数实验者忽视。
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